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人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒

【药品名称】

通用名称:人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)

英文名称:Diagnostic Kit for Antibody to Human Immunodeficiency Virus  (ELISA)

汉语拼音:Renlei Mianyi Quexian Bingdu Kangti Zhenduan Shijihe ( Meilianmianyifa)


【包装规格】

96人份/盒

【预期用途】

用于血液的筛查和临床HIV病毒感染的辅助诊断。


【检验原理】

采用EIA双抗原夹心法检测,在预包被有HIV抗原的反应孔内加入待测标本,若标本中有抗-HIV,则可在微孔板表面形成抗原-抗体复合物,再与酶标抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经显色系统显色后,根据OD 值判定有无HIV抗体的存在。


【主要组成成

1、HIV抗原包被板                   96孔×1块

2、酶结合物              12ml×1瓶

3HIV-1阳性对照                 1.0ml×1瓶 

4、HIV-2阳性对照                1.0ml×1瓶

5、阴性对照                         1.0ml×1瓶

6、浓缩洗涤液:用前每瓶1:20稀释    50ml×1瓶

7、显色剂A                         6ml×1瓶

8、显色剂B               6ml×1瓶

9、终止液                            6ml×1瓶

10、封板胶纸                           2片

11、说明书                           1份


【储存条件及有效期】

2~8℃避光保存12个月。


【适用仪器】

1、微量移液器和洁净的吸头

2、37℃恒温箱或水浴箱

3、计时器

4、洗板机

5、振荡器

6、酶标仪 检验波长450nm,参考波长630nm


【样本要求】

1、样本采集不需要特殊准备,按照正常的采血技术收集血液,全血样品最好先放置37℃静置2小时,再将血样品充分离心,3000转/分钟离心10分钟以上,使血清或血浆不含或极少含血细胞。如果为抗凝血样品,最好再放置室温2小时以上,应将血样品充分离心后。

2、样本可使用血清或血浆,柠檬酸、肝素或EDTA等抗凝剂不会影响试验结果。

3、样本中含叠氮钠会影响试验结果,高度溶血的样本,没完全收缩的血清样本或微生物污染的样本可能会引起错误的结果。

4、新鲜的样本在2~8℃无菌条件下可保存一星期,可长期储存在-20℃或以下,避免反复冻融。


【检验方法】

1、每次试验设阴性两孔、HIV-1阳性对照和HIV-2阳性对照各两孔,分别加入阴、阳性对照100μl,再设一孔空白对照,其余孔加入100μl被测样本,置37℃温育60分钟。弃去孔内样品,扣干。

2、洗板:

1)手工洗板:弃去反应板条孔内液体、静置5~10秒,拍干,弃去孔内洗涤液,拍干,勿溢出,如此反复5次,在吸水纸上拍干;用洗涤液注满每孔。

2)洗板机洗板:选择洗涤5次的程序洗板,并确保每次吸净无残留,洗液应注满每孔,最后在吸水纸上拍干。

3、每孔加酶结合物100μl(空白对照孔不加),置37℃温育30分钟,同上法洗反应板5次。

4、每孔加显色剂A液、B液各50μl,轻轻振荡后,37℃避光静置30分钟。

5、 每孔加入终止液50μl终止反应,用酶标仪读数,可选择 450nm(以空白孔校零)或双波长450/630nm,读取各孔OD值。读数须在终止反应后10分钟内完成。


【参考值】

1、试验设计要求HIV-1阳性对照和HIV-2阳性对照平均值均大于1.20,阴性对照平均值小于0.10,阳性、阴性对照OD值之差应大于1.20,否则本次试验无效。

2、若阴性对照读数小于0.05时,按0.05计算。

3、临界值(Cut off value=阴性对照平均值+0.10。

4、测试标本的OD值小于临界值则为HIV抗体阴性。

5、测试标本的OD值等于或大于临界值则为HIV抗体阳性。(注意:初试阳性标本应重新取样进行双孔复试,复试阳性者应按“全国艾滋病检测管理规范”送HIV确证实验室进行确证试验)。


【检验结果的解释】

1、阴性结果表明样本中不含有-HIV,或样本中的-HIV含量低于试剂盒的检测范围。

2、阳性结果表明样本中含有-HIV,或非特异反应素。

3、阳性结果的样本需要再进行重复试验,只有经过重复或再重复试验仍为阳性结果的样本,可认为是HIV阳性。所有重复结果为阳性的样本应经过适当的手段进行确认。

阳性结果的样本如复检为阴性结果应被认为是阴性样本。重复不出阳性结果可能属于下列一个或多个技术问题引致:

1) 由于仪器或加样器造成的交叉污染。

2) 显色剂被金属离子污染。

3) 由于试剂滴漏造成的交叉污染。

4) 不充分的洗板或最后吸去不彻底。


【试验方法的局限性】 

本品仅用于检测血清或血浆中-HIV,用于临床人类免疫缺陷病毒感染的辅助诊断。


【产品性能指标】

1、检测HIV抗体国家阴性参考品,应符合要求。

2、检测HIV抗体国家阳性参考品,应符合要求。

3、用6份HIV抗体国家最低检出限参考品,且基质血清为阴性,阳性反应不得少于3份。

4、用1份HIV抗体国家精密性参考品进行检定,CV(%)应不高于15%(n=10)。

5、稳定性实验:试剂各组分置37℃至少6天,检定结果应达到标准。


【注意事项】

1、 本品仅用于体外诊断,仅限于检测人体血清、血浆;检测结果作为诊断指示之一。

2、 从2~8℃条件下取出的样本应置室温平衡30分钟再进行检测。

3、 须确保样品加样量的准确,如果加样不准确,可能会导致错误的试验结果。

4、 使用微量移液器手工加样时,应每次更换吸头吸取样本。

5、 在操作过程中应尽量避免反应微孔中产生气泡。

6、 浓缩洗涤液系高浓度磷酸盐、如未完全溶解,同时可能会堵住自动加样器或洗板机管道,会影响试验结果,可能会形成结晶。若出现结晶。然后稀释混匀使用,请放置37℃充分溶解。

7、 封板胶纸不能重复使用。

8、 用水浴锅时,请将反应板浸放于水中1/3,底部以网格支撑物支撑,水温控制在37℃。

9、洗板:

1)以洗板机洗板时、既避免洗液过量溢出,洗板次数不应该少于5次,并经常注意检查加液头是否堵塞,洗板机的加液量至关重要,又能充满反应微孔中。

2)手工洗板时。请勿使用带纸屑的吸水材料拍板,以防外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物质与显色剂发生反应,影响检测结果的准确性。

3)洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。

4)洗板机最好在每次使用前、后、以防止管道堵塞或腐蚀,用蒸馏水或去离子水清洗干净。

10、如使用全自动酶标分析系统。应对系统参数设定做适当调整,以满足国家相关质控品要求,可能会存在系统的误差。

11、如果有任何试剂接触皮肤和眼睛,具有腐蚀性,必须用大量清水对该部位进行扩大清洗和消毒;终止液为硫酸。

12、试剂盒内有关组份及临床样本均视为有潜在传染性,请按相关的实验室工作规范来执行和处理。